بیان لاکتوفریسین شتر در گیاه توتون و بررسی مقاومت آن به باکتری های پاتوژن گیاهی

به کارگیری تکنولوژی dna نوترکیب باعث تولید بسیاری از پروتئینها و پپتیدهای درمانی از منابع متنوع که توانایی بالقوه درمانی دارند، گردیده است. یکی از روشهای تولید پپتیدهای نوترکیب، انتقال ژنهای آنها به سلولهای گیاهی و ایجاد ریشه مویین از این سلولها با استفاده از روشهای انتقال ژن و کشت بافت گیاهی می باشد. در این تحقیق لاکتوفریسین شتر بمنظور تولید پپتید نوترکیب با هدف ایجاد ریشه های مویین به گیاه توتون منتقل گردید. توالی مربوط به لاکتوفریسین شتر با همردیف سازی توالی لاکتوفرین جانوران مختلف و بررسی خواص ضد میکروبی شناسایی و بر اساس ترجیح کدونی گیاه توتون بهینه سازی شد. توالی مذکور به طور مصنوعی سنتز و در ناقل بیان pbi121 همسانه سازی گردید. سپس با استفاده از pcr و هضم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت. جهت انتقال ناقل بیان به گیاه از باکتری اگروباکتریوم رایزوژنز و ریز نمونه های برگی توتون استفاده شد. ناقل بیان به روش الکتروپوراسیون به اگروباکتریوم رایزوژنز انتقال داده شد. تایید ریشه های تراریخت با استفاده از آغازگرهای اختصاصی لاکتوفریسین و pcr انجام شد. برای ارزیابی خاصیت ضد باکتریایی پروتئین نوترکیب تولید شده عمل استخراج پروتئین از ریشه های تراژن انجام گرفت آنالیز بدست آمده مقاومت قابل ملاحظه ای نسبت به پروتئین شاهد نشان داد.